區(qū)帶電泳

是在一定的支持物上，在電場作用下，在均一的緩沖液體系，樣品中帶正或負(fù)電荷的離子分別向負(fù)或正極以不同速度移動，分離成一個(gè)個(gè)彼此隔開的區(qū)帶。這是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的電泳技術(shù)。區(qū)帶電泳按支持物的物理性狀不同，又可分為紙和其他纖維膜電泳、淀粉電泳、凝膠電泳。

等電點(diǎn)聚焦電泳

凝膠中加入兩性電解質(zhì)，在電場強(qiáng)度下形成PH梯度。樣品在電泳中，環(huán)境PH大于其PI時(shí)帶負(fù)電荷，向正極移動，環(huán)境的PH小于其PI時(shí)帶正電荷，向負(fù)極移動，當(dāng)泳動到其自身特有的等電點(diǎn)時(shí)，其凈電荷為零，泳動速度下降到零，具有不同等電點(diǎn)的物質(zhì)最后聚焦在各自等電點(diǎn)位置，形成一個(gè)個(gè)清晰的區(qū)帶，分辨率極高。

電泳技術(shù)方法

 

電泳種類很多，電泳的原理基本相同，但不同的支持物或凝膠又有各自的特點(diǎn)。

1 紙電泳

2 薄層電泳

3 薄膜電泳

4 瓊脂糖凝膠電泳

5 聚丙烯酰胺凝膠電泳

6 毛細(xì)管電泳

薄膜電泳

以醋酸纖維制成的薄膜作為支撐體的電泳稱為薄膜電泳。 醋酸纖維是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而成。 將之溶于丙酮等有機(jī)溶劑中，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜， 厚度約以0.1-0.15mm為宜。 醋酸纖維素薄膜與濾紙相比較，有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.分離效果好。對蛋白質(zhì)樣品吸附極少，無拖尾現(xiàn)象，染色后背景能完全脫色，各種蛋白質(zhì)染色帶分離清晰，因而提高了定量測定的精 確性。

2.快速省時(shí)。由于親水性較濾紙小，電滲作用小，電泳時(shí)大部分電流是由樣品傳導(dǎo)的，所以分離速度快，電泳時(shí)間短，一般電泳45-60min即可，加上染色、脫色，整個(gè)電泳完成僅需90min左右。

3.靈敏度高，樣品用量少。血清蛋白電泳僅需2μL血清，故常用于檢測在病理情況下微量異常蛋白的改變。

4.應(yīng)用面廣。某些蛋白在紙上電泳不易分離，如胎兒甲種球蛋白、溶菌酶、胰島素、組蛋 白等用醋酸纖維素薄膜電泳能較好地分離。

5.易保存，易定量。醋酸纖維素薄膜電泳染色后，經(jīng)冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液浸泡 后可制成透明的干板，有利于掃描定量及長期保存。

由于醋酸纖維素薄膜電泳操作簡單、快速、價(jià)廉。目前已廣泛用于分析檢測血清蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、酶、多肽及其他生物大分子。


醋酸纖維素薄膜電泳

1．儀器： 中低壓電源、 DYCP-38C電泳槽 、WD-9404型超級加樣器

2．試劑：（1）pH8.6 巴比妥緩沖液：二乙基巴比妥酸，二乙基巴比妥 鈉；

（2）染色液：麗春紅S ，三氯乙酸；

（3）漂洗液：95%乙醇，冰醋酸 ；

（4）透明液：無水乙醇，冰醋酸。

3、介質(zhì)：醋酸纖維素薄膜，7×9cm等

醋酸纖維素薄膜電泳注意事項(xiàng):

1.粗糙面點(diǎn)樣. 1-2μl為宜

2.恒流電泳:電流強(qiáng)度0.4～0.6mA/cm

3.pH8.6 巴比妥緩沖液（離子強(qiáng)度0.06）

4.染色5min即可

5.固定保存：將干燥的電泳圖譜膜條放入透明液中浸泡10–15分鐘后，取出貼于潔凈玻璃板上，干燥后，即為透明薄膜圖譜。